Lipidomics/脂质组学
详细信息
1. 脂质是自然界中存在的一大类极易溶解于有机溶剂、在化学成分及结构上非均一的化合物,主要包括脂肪酸及其天然发生的衍生物(如酯或胺),以及与其生物合成和功能相关的化合物。
2. 脂质组学(lipidomics)是对生物体、组织或细胞中的脂质以及与其相互作用的分子进行全面系统的分析、鉴定,了解脂质的结构和功能,进而揭示脂质 代谢与细胞、器官乃至机体的生理、病理过程之间的关系的一门学科。目前脂质组学已经被广泛运用于药物研发,分子生理学,分子病理学,功能基因组学,营养学及环境与健康等重要领域。
3. 脂质组学研究的技术主要包括脂质的提取、分离、分析鉴定以及相应的生物信息学技术,生物质谱技术是目前脂质组学研究的核心工具,基于质谱技术的脂质分析策略主要包括液相色谱—质谱联用技术和“鸟枪法”脂质组学技术(shotgun lipidomics),液相色谱—质谱联用技术策略是利用不同的脂质提取方法分别提取不同种类的脂质(lipid classes),如脂肪酸类,甘油磷脂类,固醇类等,或根据不同脂质种类的极性差异,利用正相色谱在种类的水平上将生物样本的脂质分为不同的组分,如磷 脂酰胆碱类( glycerophosphocholines,GPChos)、磷脂酰乙醇胺类( glycerophosphethanolamines,GPEtns)、鞘磷脂类(sphingomyelin,SM)以及心磷脂(cardiolipin,CL) 等。然后利用反相色谱将组分中的脂质分子(molecular species)进一步分离,进而利用质谱进行定性、定量分析。
4. 鸟枪法,技术策略通常采用直接进样(direct infusion),不需要经过色谱分离,而直接对脂质提取物进行分析鉴定。其原理主要是源内分离(intrasource separation),即根据脂质分子在不同pH 值条件下带电倾向的差异,通过调整样品的pH值,改变脂质分子的离子化倾向,并结合ESI正、负离子检测模式的切换,达到离子化过程中分开检测不同脂质分子的目的,最后利用串联质谱技术进行分析鉴定和定量。
技术路线及方法:
脂质大体分为八大类:
1. 脂肪酸类(fatty acids)
2. 甘油脂类(glycerolipids)
3. 甘油磷脂类(glycerophospholipids)
4. 鞘脂类(sphingolipids)
5. 固醇脂类(sterol lipids)
6. 孕烯醇酮脂类(prenol lipids)
7. 糖脂类(saccharolipids)
8. 多聚乙烯类(polyketides)
脂质组学平台:
脂质组 | 厂商 | 型号 |
LC-MS/MS | AB SCIEX | QTRAP®6500 LC/MS/MS系统 |
样品要求
血清:
1)样品量要求:500µl/例,一定避免反复冻融。
2)收集步骤:血液收集在离心管中静置30分钟进行凝固。然后离心取上清装载干净的离心管中,再离心5分钟,8000rpm,取上清分装到冻存管中,每管0.5ml,-80度冻存寄送。
3)组织及细胞沉淀:100mg/sample。