1.如何选择培养基？

　　培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM 中培养的细胞，很可能在 DMEM 或 M199 中同样很容易生长。总之，首选 MEM 做粘附细胞培养、RPMI-1640 做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是 AIM V 培养基（SFM）。

　　2.为什么要热灭活血清？

　　加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养 ES 细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

　　3.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？

　　L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有终确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。

　　4.GlutaMAX-I 是什么？培养细胞如何利用 GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？

　　GlutaMAX-I 二肽是 L-谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的 α-氨基用 L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放 L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I 二肽非常稳定，即使在 121 磅灭菌 20 分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。

　　5.为什么培养基中可以省去加酚红？

　　酚红在培养基中被用来作为 PH 值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。

　　6.如何用台盼兰计数活细胞？

　　用无血清培养基把细胞悬液稀释到 200-2000 个/毫升，在 0.1 毫升的细胞中加入 0.1 毫升的 0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。

　　7.如何消除组织培养的污染？

　　当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查 HEPA 过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素 B 和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。

　　1、在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。

　　2、分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素 B 推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。

　　3、每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。

　　4、确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度 2-3 倍浓度的抗生素的培养液培养细胞 2-3 代。

　　5、在无抗生素的培养基中培养细胞一代。

　　6、重复步骤 4。

　　7、在无抗生素的培养基中培养 4-6 代，确定污染是否以已被消除。

　　8.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？

　　丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。

　　9.Hank’s 平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要 CO2 培养箱。原因是什么？

　　Hank’s 平衡盐溶液（HBS）和 Earle’s 平衡盐溶液（EBS）有什么本质的功能差别？HBS 和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平，碳酸氢钠的含量在 Eagles (2.2g/L)中比在 Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的 CO2 平衡，以维持溶液的PH 值。Eagles 液在空气水平的 CO2 中，溶液会变碱，Hanks 液在 CO2 培养箱中会变酸。如果希望在 CO2 培养箱中保存组织，需要用 Eagles 液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用 Hanks 液就可以了。