上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于 上皮组织，故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细 胞，培养时生长速度往往超过上皮细胞，并难以纯化，同时上皮细胞难以在体外 长期生存，因此纯化和延长生存时间是培养关键。 体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜， 因此培养在有胶原的底物上可能利于生长， 另外人或小鼠表皮细胞培养在以 3T3 细胞为饲养层（用射线照射后）时，细胞易 生长并可发生一定程度的分化现象。降低 PH、Ca2+含量和温度，向培养基中加 入表皮生长因子，均有利于表皮细胞生长。 以表皮细胞为例， 用皮肤表皮和真皮分离培养法可获得纯上皮细胞， 其法如下 （黑 木凳志夫 1981）

　　1、 取材： 外科植皮或手术残余皮肤小块， 早产流产儿皮肤更好， 取角化层薄者， 切成 0.5－1 平方厘米小块。

　　2、置 0.02%EDTA 中，室温，5 分钟。

　　3、换入 0.25%胰蛋白酶中，4℃过夜。

　　4、分离：取出皮块，用血管钳或镊子将表皮与真皮层分开。

　　5、取出表皮，剪成更小的块后，置 0.25%胰酶中，37℃，30—60 分钟。

　　6、反复吹打，制成悬液。

　　7、培养：用 80 目不锈钢纱网滤过后，低速离心，吸去上清。

　　8、直接加入培养基（Eagle 加 20%小牛血清）制成细胞悬液，接种入培养瓶，CO2 温箱培养。

　　第二节 内皮细胞培养

　　内皮细胞易于从大血管分离培养成单层细胞，对于研究内皮细胞再生、肿瘤促血 管生长因子（TAF）等有很大价值。 研究人内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法为简便，其法如下：

　　1、产后新鲜脐带，无菌剪取 10—15 厘米长一段，如不能立即培养，可于 12 小 时内保存于 4℃。

　　2、用三通注射器吸取温 PBS 液注入脐静脉中洗去残血，在入口处用线绳扎紧， 以防液体返流。

　　3、用血管钳夹紧脐带一端，从另一端向脐静脉中徐徐注入终浓度为 0.1%的粗制 胶原酶，充满血管，消化 3—10 分钟；注入口用线绳扎，以防液体返流。

　　4、吸出含有内皮细胞的消化液，于离心管中，注入温 PBS 轻轻反复冲洗后，一 并注入离心管中（此步骤可重复） 。

　　5、离心去上清，加入 RPMI1640 培养液制成细胞悬液，接种入培养器皿中，置温 箱培养。两至三天可见细胞长成单层。

　　第三节 神经细胞培养

　　神经细胞（神经元）不易培养，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或加 入神经生长因子和胶质细胞因子时，可出现一定程度的分化，长出突起等现象， 但很难使之增值。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。 人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养，不仅能获得生长的胶质细胞，也可 形成能传代的二倍体细胞系。一般说来，胶质细胞在培养中生长不稳定，不易自 发转化， 但对外界因素仍保持很好的敏感性， 可用 ROUS 病毒和 SV4 等诱发转化。 设备： 无菌操作设备。