准备一个培养培养瓶，使其包含产品说明书中列出的推荐体积的适当培养基，并针对温度和 pH (CO 2 )进行平衡。

　　在 37°C 或该细胞系的正常生长温度下，在水浴中轻轻搅拌解冻小瓶。解冻应该很快，大约 2 分钟或直到冰晶融化。

　　从水浴中取出小瓶，并通过浸入或喷洒 70% 乙醇来净化。在层流组织培养罩中遵循严格的无菌条件进行所有进一步操作。

　　拧下小瓶的顶部并将内容物转移到含有 9 mL 推荐培养基的无菌离心管中。通过温和离心（125 × g 10 分钟）去除冷冻保护剂 (DMSO)。丢弃上清液，将细胞重悬于 1 或 2 mL 完全培养基中。将细胞悬浮液转移到含有完全生长培养基的培养培养瓶中，并通过轻轻摇动彻底混合。

　　24 小时后检查细胞培养物，并根据需要进行继代培养。

　　这里需要注意的是：一些细胞系可能需要几天时间才能从冷冻保存中完全恢复。比如：一些杂瘤细胞在培养的第一天活力很差，会产生细胞碎片。解冻后，细胞将开始恢复并进入指数增长。